xCElligence RTCA SP96孔实时无标记细胞分析仪

参考信息

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**阻*说明

在**生物*学测定和全身生物**实验之间定位，基于**的测定是基础和应用生物学研究不可缺少的工具。然而，许多基于**的测定法的作用通过以下方式被减少：（1）需要使用标记；（2）与连续监测不相容（即仅产生终点数据）；（3）与正交试验不相容；（ 4）无法提供客观/定量的读数。然而，这些缺点都是通过非侵入性的，无标记的和实时的**阻*测定来克服的。 **阻*测定的功能单元是融合到微量滴定板孔的底部表面的*组金微电*（图1）。当浸没在导电溶液（如缓冲液或标准组织培养基）中时，在这些电*上施加电位会使电子离开负*，通过本体溶液，然后沉积到正*端以完成电路。因为这种现象取决于电*与本体溶液相互作用，所以在电* - 溶液界面处的粘附**的存在**了电子流动。该阻*的大小取决于**的数量，**的大小和形状以及** - 基底附着质量。重要的是，金微电*表面和施加的电位（22 mV）都不影响**的**或行为。

图1.**阻*装置概述在单元格添加之前和之后显示单个孔的侧视图。电*和电池都不被拉伸（为了清晰起见，它们被放大）。在不存在电池的情况下，电流自由流动通过培养基，完成电*之间的电路。由于**在电*上粘附并**，电流流动受阻，提供了**数量，**大小/形态以及** - 基质附着质量的非常灵敏的读数。

阻*电*

ACEA的实时微电子检测板—E-Plate板每孔中的金微电*生物传感器覆盖70-80％的表面积（取决于是否存在视野区域）。而不是图1所示的简*的电*对，每个孔中的电*被连接成形成交错阵列的“线”（图2）。这种布置可以同时监测**群体，从而提供*确的灵敏度：附着于板的**数，**的大小/形态以及** - 基质附着质量。

图2. ACEA实时微电子检测板— E-Plate板上的阻*电*。 （A）实时微电子检测板的每个孔中使用的叉指电*的简*示意图。电*没有按比例绘制（仅显示*些电*，为了清晰起见，它们已被放大）。虽然**也可以在金电*表面上可视*，但在中间的无电*区域有助于显微成像（亮场，荧光等）。（B）16孔E-Plate板中单井的照片。（C）放大阴影电*和未染色人体**的明场图像。（D）复合显微镜中观察到的金电*和结晶紫染色的人**。

实时阻力跟踪说明

使用称为**指数（CI）的无单位参数报告了由贴壁**引起的电子流的阻*，其中CI=(时间点n阻*-不存在**时阻*）/标称阻*值。图3提供了在建立和*行凋亡实验过程中实时阻*曲线的通用示例。在**添加到孔中的头几个小时之后，阻*快速**。这是由于悬浮液中的**脱落，沉积在电*上并形成局部粘连。如果添加的**的初始数量低，并且在井底上存在空的空间，则**将**，导致CI逐渐但稳定**。当**达到汇合CI值时，反映了大容量介质可接近的电*表面积不再改变的事实。此时加入**凋亡诱导剂导致CI降低*零。虽然这个通用实例涉及**融合时的**添加，基于阻*的测定是非常灵活的，并且还可以评估初始**粘附到电*的速率和**，或****的速率和**。

图3.用于建立和*行凋亡测定的通用实时阻*曲线。 在文中*释了阻*曲线的每个阶段及其产生的蜂窝行为。

上述通用示例，图4显示了使用ACEA的xCELLigence实时单元分析（RTCA）仪器中的E-Plate板中采集的实际实时阻*数据。 图4A显示将A549**添加到E-Plate板后的头两个小时的阻*曲线，其中孔预*用不同浓度的胶原IV包被。 虽然图4B显示了在将HeLa**暴露于GPCR激动剂多巴胺的*初几分钟内发生的**指数的变*，图4C评估了在20小时内NK**介导的癌**的**溶*。 图4D突出显示根据**的作用机制可能在**指数中发生的变*。

图4.使用E-Plate和xCELLigence RTCA仪器获得的实时阻*曲线的示例。 （A）实时监测已经预*涂覆不同浓度胶原IV的E-Plate孔的A549**粘附。请注意阻*值（**指数）与显微镜中可见的贴壁**数之间的相关性。 （B）暴露于不同浓度GPCR激动剂多巴胺的HeLa**的实时阻*曲线。黑色箭头表示多巴胺加入的时间。 （C）用于NK**介导的MCF7乳腺癌**溶*的实时阻*曲线。 （D）暴露于**的A549**的实时阻*曲线显示各种作用机制。

与**相关的抵*力

RTCA提供**数量，**率，**大小/形状和** - 底物附着质量的定量读数。由于这些物理性质是数千种不同基因/蛋白质的产物，因此RTCA可以为****和行为提供非常广泛的视野。在xCELLigence仪器上已经成功地分析了从内皮屏障功能和趋*性到丝状伪足动力学和免疫**介导的**溶*的*切。尽管它们的广泛性，xCELLigence测定仍然能够询问非常具体的生*和**现象。适当使用对照和/或正交技术使得可以将阻*迹线的特征与特定的**/分子现象相关联。要了*如何做到这*点，并且看到xCELLigence RTCA技术的敏感性和多功能性，请仔细阅读这里突出显示的许多具体应用。

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